Seluruh sampel saliva (air liur) dan plasma diperoleh dari 68 anak-anak dari kedua macam kelamin (43 anak laki-laki dan 25 anak perempuan) yang berusia antara 7 dan 15 tahun. Subyek direkrut dengan pariwara di Cambridge, Massachusetts dan Portland, Maine dari Februari 2011 hingga September 2011. Penelitian ini disetujui oleh Forsyth Institutional Review Board dan dilakukan sesuai dengan Deklarasi Helsinki tahun 1975, sebagaimana direvisi pada tahun 2013. Persetujuan orang tua dan persetujuan anak diperoleh sebelum pencatatan mereka. Persetujuan untuk mempublikasikan keluaran penelitian ini diperoleh sebagai bagian dari prosedur persetujuan yang diinformasikan. Persetujuan ini ditulis dan sekarang disimpan sebagai file rahasia.

2.2 Koleksi sampel saliva dan darah

Dalam setiap kasus, sampel saliva dan darah dikumpulkan dalam kondisi puasa (di pagi hari sebelum sarapan atau setidaknya 3 jam setelah makan). Lima mL darah dan 3 mL air liur dikumpulkan dari masing-masing peserta. Setiap anak membilas mulut mereka dengan 15 mL air dan ditelan sebelum pengumpulan air liur (tidak ditentukan jamnya). Seluruh air liur (= 3 mL) dikumpulkan dalam tabung sentrifugal sekrup plastik 15‐mL (#430791, Corning Incorporated Life Sciences, Tewksbury, Massachusetts, AS) dengan meneteskan air liur tanpa stimulasi menggunakan teknik standar.

Sampel saliva yang dipelihara dengan es dengan cepat diangkut ke laboratorium di mana mereka disentrifugasi pada 2800 RPM selama 20 menit untuk menghilangkan puing-puing partikulat dan sel mukosa eksfoliasi. Air liur supernatan ditransfer ke screw‐cap, 1‐mL, tabung penyimpanan barcode 2D (tabung penyimpanan Matrix 2D Barcoded ScrewTop, Thermo Fisher Scientific Inc., Hudson, New Hampshire, AS) dan dibaca oleh pembaca barcode (Thermo Scientific VisionMate ST Barcode Reader, Thermo Fisher Scientific Inc.), di mana nomor peserta dikaitkan dengan nomor sampel.

Segera setelah pengumpulan saliva, darah diambil oleh phlebotomist dari arteri cubital median (BD Hemogard plus, K2 BD367863, tutup lavender), sentrifugal 10 menit pada 2000 × g dalam sentrifugal dingin. Sampel air liur dan plasma disimpan pada suhu −80°C sampai sampai pengujian.